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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
Beta-TC-6:BetaTC6
1×106
P-X1037
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱：beta-TC6; beta-TC-6; BetaTC6; betaTC6；小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞
種屬來源：小鼠
年齡性別：不詳
組織來源：胰；胰島素瘤
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)貼壁生長(zhǎng)，少量懸浮
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介：Beta-TC-6細(xì)胞來源于轉(zhuǎn)基因小鼠中生長(zhǎng)的一個(gè)胰腫瘤(胰島素瘤)，這種小鼠攜帶了大鼠胰島素Ⅱ基因啟動(dòng)子調(diào)控的SV40早期基因的假基因結(jié)構(gòu)。Beta-TC-6細(xì)胞包含大量的胰島素和小量的胰高血糖素及生長(zhǎng)抑素；Beta-TC-6細(xì)胞能響應(yīng)葡萄糖而分泌胰島素。
生物等級(jí)：2 [Cells contain SV40 viral DNA Sequences]
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)：無
基因表達(dá)情況：insulin, glucagon, and somatostatin。
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-11506
培養(yǎng)基：DMEM+15% FBS+雙抗
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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猴白介素2(IL-2)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
腦發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白抗體 Drebrin |
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IL-2 ELISA Kit |
氧固醇結(jié)合蛋白樣2抗體 OSBPL2 |
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人鵝膏蕈堿elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
GCLM重組兔單克隆抗體 GCLM |
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HumanAmanitinELISAKit |
FITC標(biāo)記小鼠Qa-2單克隆抗體 mouse Qa-2/FITC |
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乙醇胺激酶β抗體 CHKL |
鳥苷酸環(huán)化酶激活蛋白1抗體 GCAP1 |
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丁?；o酶A合成酶3抗體 ACSM3 |
脫中胚蛋白抗體 TBR2 |
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兒茶酚O甲基移位酶抗體 COMT |
RNA結(jié)合蛋白24抗體 RBM24 |
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源盒基因HOXA7蛋白抗體 HOXA7 |
SC5DL蛋白抗體 SC5DL |
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?載玻片細(xì)胞βCOLLAGEN III蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 |
6號(hào)染色體開放閱讀框58抗體 C6orf58 |
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大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)elisa檢測(cè)試劑盒 |
ABI1/SSH3BP1蛋白抗體 ABI1 |
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轉(zhuǎn)基因玉米CBH351（starlink）品系基因檢測(cè)試劑盒 |
甲型流感病毒血凝素2抗體 H1N1 Hemagglutinin 2 |
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小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)elisa檢測(cè)試劑盒 |
精子相關(guān)抗原5抗體 MAP126 |
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人CX3CR1elisa檢測(cè)試劑盒 |
小鼠旁血小板溶蛋白(PPL)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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體液基質(zhì)金屬 125I位素標(biāo)記檢測(cè)試劑盒 |
Beta-TC-6小鼠胰島素瘤胰島Beta細(xì)胞大鼠骨特性堿性磷酸酶C端肽elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
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Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒50T |
酵母核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒100T |
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小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)elisa檢測(cè)試劑盒 |
超氧化物歧化酶（SOD）活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。