質(zhì)粒的提取 (Tiangen質(zhì)粒提取試劑盒)過(guò)程：

1、挑菌： 選取培養(yǎng)板中大小中等的單個(gè)菌落， 消du牙簽接種到10ml搖菌管中， 其中含有卡那-霉素的LB約5ml， 37 °C， 220rpm恒溫?fù)u床中震蕩培養(yǎng)過(guò)夜。

   2、取上述2.0ml培養(yǎng)液， 于常溫下12000 rpm離心1分鐘， 棄上清， 干燥沉淀。

3、 加入250ul溶液P1(配有去RNA酶， 4 °C保存)， 渦旋振蕩， 完全懸浮xi 菌，不能留有沉淀， 否則會(huì)影響裂解。

4、加入250ul溶液P2， 快速上下顛倒8次， 常溫靜置3分鐘， 可見(jiàn)混合液逐漸變清、 粘稠， 表示已充分裂解。

5、再加入350 ul溶液Ⅲ， 快速上下顛倒8次， 可見(jiàn)白色絮狀物出現(xiàn)。

6、 常溫12000rpm離心10分鐘， 所得上清液倒入已經(jīng)用BL平衡過(guò)的過(guò)濾柱中，注意不要倒入白色絮狀物沉淀， 靜置3分鐘， 12000 rpm離心1分鐘。

    7、 加入500ul溶液PD， 12000 rpm離心1分鐘。

8、 加入600 ul溶液PW， 12000 rpm離心1分鐘； 此步驟再重復(fù)1次； 棄廢液后空管再次12000 rpm離心2分鐘。

    9、于超凈臺(tái)通風(fēng)干燥， 放置2-5分鐘， 加入33ul已加熱至65 °C的已滅jun 的ddH 2 O， 室溫靜置3分鐘， 12000 rpm離心2分鐘， 得到相關(guān)質(zhì)粒DNA， 測(cè)濃度， -20 °C保存?zhèn)溆谩?