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RAW 264.7+GFP小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞+GFP
英文簡稱
規(guī)格
貨號
RAW 264.7+GFP:RAW 2647GFP
1×106
P-X1101
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱：RAW264; RAW2647; RAW264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; Raw264.7；小鼠單核巨噬細(xì)胞
種屬來源：小鼠
年齡性別：雄；成年
組織來源：Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細(xì)胞；巨噬細(xì)胞
生長特性：貼壁生長，不用胰酶消化
細(xì)胞形態(tài)：單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞
背景簡介：RAW264.7細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細(xì)胞無作用。 RAW264.7細(xì)胞容易分化，不建議用胰酶消化，或者密度過高才傳代
生物等級：2
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測：無
基因表達(dá)情況：lysozyme, H-2d; Tested and found negative for ectromelia virus (mousepox).
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; TIB-71 ECACC; 91062702
培養(yǎng)基：DMEM+10%FBS+PS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存
倍增時間：~12-30小時
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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Hermansky-Pudlak綜合征蛋白4抗體 |
嘌呤核苷磷酸化酶抗體 |
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HPS4 |
谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶3抗體 Anti-TGM3 |
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肌動蛋白α3抗體 |
C9orf7 |
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ACTG2 |
9號染色體開放閱讀框7抗體 |
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平足蛋白抗體(管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白) Anti-Podoplanin Protein/gp36 |
Nucleoside phosphorylase |
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果糖-2,6-二磷酸酶1抗體 Anti-PFKFB1 |
ALAS-E |
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缺氧誘導(dǎo)基因95抗體 Anti-SESN2/Hi95 |
鴨沙門氏菌抗體 |
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5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體 |
Duck salmonella |
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大鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)elisa分析檢測試劑盒 |
核酸敏感元件結(jié)合蛋白1 Anti-YBX-1/YB1 |
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TIEG1 ELISA Kit |
維甲酸誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤蛋白1抗體 Anti-NAV2/RAINB1 |
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人胱抑素A(CSTA/STF1/STFA)elisa分析檢測試劑盒 |
膽堿酯酶抑制劑8抗體 Anti-RIC8A |
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CSTA/STF1/STFAELISAkit |
睪丸蛋白聚糖1抗體 Anti-SPOCK1/Testican 1 |
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CASPASE-8蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 |
糖果甘素（dulcin）含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒 |
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高爾基體提取試劑盒50T |
RAW 264.7+GFP小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞+GFP小鼠補(bǔ)體蛋白5(C5)elisa檢測試劑盒 |
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環(huán)指蛋白191抗體 |
精子成熟相關(guān)蛋白BOULE抗體 |
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LONRF1/RNF191 |
BOULE |