操作流程：

1、您收到母細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

服務(wù)流程： 

（1）客戶(hù)提供：目的細(xì)胞具體信息；

（2）操作過(guò)程：細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，細(xì)胞發(fā)貨；

（3）交付內(nèi)容：細(xì)胞系/細(xì)胞株，以及細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū)。

英文簡(jiǎn)稱(chēng)：GS-HEPG2細(xì)胞

產(chǎn)品名稱(chēng)：肝癌細(xì)胞亞型（過(guò)表達(dá)谷氨酰氨合成酶）

規(guī)格：

傳代方法：

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明 ：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)（4h左右），穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過(guò)夜。

3. 靜置后鏡檢，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

4. 貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。

5. 細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清。剛開(kāi)始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶(hù)自備的培養(yǎng)基，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。

6. 細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制，

7. 因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過(guò)程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過(guò)一周的細(xì)胞我們會(huì)酌情處理，但不提供免費(fèi)更換服務(wù)。 細(xì)胞運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

125mL HEPES Lysis Buffer with Triton,2X HEPES Lysis Buffer with Triton,2X 常溫保存　DZIP1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

250mL HEPES Protein Extraction Buffer,5X HEPES Protein Extraction Buffer,5X 常溫保存　chordin 抗體, 兔單抗 IHC-P    50 μg

250ml HEPES-Triton Protein Extraction Buffer  HEPES-Triton Protein Extraction Buffer  常溫保存　Chordin 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH7.0  HEPPS Buffer,0.2M,pH7.0  常溫保存　ARID3B 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH7.4  HEPPS Buffer,0.2M,pH7.4  常溫保存　c-Met / HGFR 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH8.0  HEPPS Buffer,0.2M,pH8.0  常溫保存　Estrogen Receptor alpha 抗體, 兔單抗 WB    50 μg

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH8.5  HEPPS Buffer,0.2M,pH8.5  常溫保存　Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IP    50 μg

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.0  HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.0  常溫保存　ALPL 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5  HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5  常溫保存　STRA8 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH8.0  HEPPSO Buffer,0.2M,pH8.0  常溫保存　Progesterone receptor / PGR 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P   IF  ICC/IF    50 μg

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH8.5  HEPPSO Buffer,0.2M,pH8.5  常溫保存　FNDC5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

250mL HPB 5X (High Phosphate Buffer)  HPB 5X (High Phosphate Buffer)  常溫保存　UCP1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

250mL Human RBC Lysis Buffer（人紅  裂解液）  Human RBC Lysis Buffer 常溫保存　EGFR / HER1 / ErbB1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

肝癌細(xì)胞亞型（過(guò)表達(dá)谷氨酰氨合成酶）human C3  補(bǔ)體C3抗體規(guī)格: 0.1ml

C5b-9  末端補(bǔ)體復(fù)合物抗體規(guī)格: 0.2ml

CQ028  多癌基因下調(diào)蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

CA125/MUC16  卵巢癌抗原抗體規(guī)格: 0.1ml

CA153/EMA/Mucin 1  乳腺癌相關(guān)抗原抗體規(guī)格: 0.1ml

CA153/MUC1/KL-6  乳腺癌相關(guān)抗原抗體規(guī)格: 0.1ml

CACH2/CaV1.2  L型鈣通道蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

CACNA1G/Cav3.1  電壓依賴(lài)性鈣通道Cav3.1抗體規(guī)格: 0.1ml

CACNA1A/Cav2.1  電壓依賴(lài)性鈣通道Cav2.1抗體規(guī)格: 0.2ml

CACH3/CaV1.3  L型鈣通道蛋白a1亞型3抗體規(guī)格: 0.2ml

CACH6/Cav2.3  L型鈣通道蛋白a1亞型6抗體規(guī)格: 0.2ml

DFF-40beta/CAD/CPAN  Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抗體規(guī)格: 0.1ml

Casein  酪蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml