咨詢電話：18117197628
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
DAMI:DAMI
1×106
P-X699
產(chǎn)品詳情：
生長(zhǎng)特性 懸浮細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 巨核細(xì)胞樣
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1×10^5-1×10^6個(gè)/mL
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 Dami細(xì)胞是一株從一個(gè)巨核細(xì)胞白血病患者的血液建立的人類巨核細(xì)胞。Dami細(xì)胞以懸浮生長(zhǎng)為主，細(xì)胞群體倍增時(shí)間是24-30小時(shí)。至少89%的Dami細(xì)胞可與血小板糖蛋白(GP)Ⅰb、Ⅱb、Ⅲa及血型糖蛋白單克隆抗體反應(yīng)。Dami細(xì)胞不與抗腺、單核細(xì)胞、粒性白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞抗原的抗體反應(yīng)。Dami細(xì)胞為研究巨核細(xì)胞生化及分化提供了的模型。(STR鑒定位點(diǎn)與HEL一致）
年齡（性別） 30歲
組織來源 巨核細(xì)胞白血病
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 白血病細(xì)胞
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-9792
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
|
癌基因蛋白抑瘤素M抗體 |
蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體 P4HB |
|
Oncostatin M |
磷脂?；嫉鞍拙厶?span>-3抗體 glypican 3 |
|
9號(hào)染色體開放閱讀框91抗體 |
選擇性剪接因子3亞基1抗體 SF3A1 |
|
C9ORF91 |
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3單克隆抗體 [KO驗(yàn)證抗體] STAT3 |
|
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 ANKRD17 |
凋亡誘導(dǎo)受體TNFRSF25抗體 D3R |
|
FAM134C蛋白抗體 FAM134C |
甲酰甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)移酶抗體 PFAS |
|
FBXL14蛋白抗體 FBXL14 |
1號(hào)染色體開放閱讀框150抗體 C1orf150 |
|
基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體 MMP9 |
22號(hào)染色體開放閱讀框43抗體 C22orf43 |
|
冰凍切片組織CASPASE-9蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 |
絲裂原活化蛋白激酶13抗體 MAPK13/SAPK4 |
|
大鼠周期素依賴性激酶2(CDK2)elisa檢測(cè)試劑盒 |
胎盤蛋白6抗體 PL6 |
|
通用型?？谔阋撸?span>FMDV）基因檢測(cè)試劑盒 |
PE標(biāo)記小鼠CD122單克隆抗體 mouse CD122/PE |
|
小鼠白介素1α(IL-1α)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
RhoC抗體 [KO驗(yàn)證抗體] RHOC |
|
人L-腎上腺素elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
小鼠神經(jīng)肽FF(NPFF)elisa檢測(cè)試劑盒 |
|
組織PKCβ2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） |
DAMI人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞大鼠活性氧調(diào)制因子1(ROMO1)elisa檢測(cè)試劑盒 |
|
倉(cāng)鼠γ干擾素(IFNG)elisa檢測(cè)試劑盒 |
裸鼠elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
|
小鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
石蠟切片中性脂質(zhì)蘇丹黑間接染色試劑盒 |