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自備儀器和試劑耗材：
儀器準(zhǔn)備：
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準(zhǔn)備：
1.PBS 緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備：
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
產(chǎn)品簡介：
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
檢測方法 |
適用樣本 |
保存溫度 |
貨號 |
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甲醛明膠包被液 |
100ml |
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2-8℃ |
BH-D85682 |
使用方法：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
蛋白酶抑制劑在 2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
注意事項：
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得佳實驗效果。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4. 樣品或試劑被污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5. 好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底殘留清潔劑。
6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
操作步驟：
A：組織中提取
1.收集 0.1g 組織，加入 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑（依據(jù)實驗選擇），冰上用組織研磨器或勻 漿管研磨。
2.將勻漿后樣品轉(zhuǎn)移至 1.5ml 離心管中，11000rpm 5min，吸棄上清保留沉淀。
3.至步驟 2。
B：細(xì)胞中提取
1.收集約 10 8個細(xì)胞，3000rpm 5min（懸浮細(xì)胞直接離心，貼壁細(xì)胞使用細(xì)胞刮刀或胰蛋白酶消化離心收集 均可。注意用預(yù)冷 PBS 清洗殘留培養(yǎng)基和胰蛋白酶等），吸棄上清。
2.至步驟 1。
步驟 1：加 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑（依據(jù)實驗選擇），冰上孵育 30min（每 10min 用移液槍 吹打一次），4°C 11000rpm 離心 5min，棄上清。
步驟 2：于上述步驟離心管中加入 200μl Lysis Buffer 2，置于冰上 30min（每 10min 渦旋一次），4°C 11000rpm 離心 5min，吸取上清于一新離心管中。
步驟 3：加入 40μl Balance Buffer 于上述步驟離心管中，用移液槍輕輕吹勻。
步驟 4：使用 BCA 定量試劑盒定量。
步驟 5：于步驟 3 離心管中加入 2.4μl Adjust Buffer，輕輕吹勻，并應(yīng)用于下游研究。
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胰酶-EDTA，
0.05%胰酶，EDTA。4Na 不含鈣鎂離子，含酚紅
保存：-5 - -20°
胰酶-EDTA，（10X）
0. 5%胰酶，EDTA。4Na 無條件下以Hank’s液10倍稀釋，
不含鈣鎂離子，保存：-5 - -20°
胰酶-EDTA，
0.25%胰酶，EDTA。4Na 不含鈣鎂離子，含酚紅
保存：-5 - -20°
DPBS，（1X）（IVD） 含鈣鎂離子，不含酚紅14040-141
PBS，（1X） pH7.220012-027
胰酶（1：250），干粉 保存：2-8°
PBS，（10X） pH 7.270013-032
DPBS，（1X），（IVD） 含1000mg/l葡萄糖，36mg/l丙酮酸鈉，
鈣鎂離子，不含酚紅14287-080
DPBS，（10X），（IVD） 含鈣鎂離子，不含酚紅14080-055
PBS，（1X） pH 7.410010-023